产品货号:
BTN100941
中文名称:
全基因组DNA扩增试剂盒(荧光染料MDA法)
英文名称:
Universal Whole Genome Amplification Kit;
产品规格:
25T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是以MDA技术为基础开发的全基因组DNA扩增试剂盒,基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和超强链取代能力,故所得扩增DNA突变率比PCR低至少10倍。可以将基因组DNA扩增上万倍,非常适用于痕量珍贵样品。
可使用各种来源的样品,尤其是痕量法医样品,包括全血,干血,发根,口腔粘膜刮液培养细胞,真菌和病毒等。扩增产物可用于多种后续试验,包括多重PCR、长片断PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异,微卫星差异,SNP,STR)等。
利用随机引物结合在全基因组(变性后)的不同位置,然后利用具有超长DNA合成能力的phi29 DNA聚合酶,进行链取代合成。MDA扩增DNA的示意图如下:
- 操作简便快捷,恒温(30℃)反应,无须贵重PCR仪即可实现扩增。
- 含有荧光染料,故可以实时检测扩增效果,不需要反应结束后电泳检测,避免浪费宝贵的扩增产物。
- 本制品只能用于科研,且只适用于扩增纯化好的基因组DNA。
组分 | 规格 |
2×MDA法全基因组扩增缓冲液 | 125μL |
phi29 DNA聚合酶(10U/μL) | 25μL |
保存:-20℃,有效期1年。
- 如果有N个DNA模板,则标记2N个PCR管,多出的一组为不加模板的阴性对照管。下表以1个样本为例子:
成分 样品管 无模板对照 2×MDA法全基因组扩增缓冲液 5μL 5μL 自备DNA样本(10~100ng) 1~4μL - 自备超纯水 至9μL 至9μL - 在PCR仪器上95℃3分钟变性模板DNA。注意:必须打开热盖。
- 冰上放置待用。
- 各加入1μL phi29 DNA聚合酶(10U/μL),轻柔吹打混合均匀。
- 放回PCR仪器,设置MDA反应为30℃ 24小时,65℃ 10分钟。由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性,所以强烈推荐30℃扩增反应结束后,必须65℃保温20分钟以将酶彻底灭活,否则在保存过程中它会逐渐降解扩增得到的DNA。本制品含有荧光染料,故最好使用荧光定量PCR仪,设置在30℃时,每10分钟在SYBR通道采集一次荧光信号。10小时后,阳性样品应该有标准的S扩增曲线,无模板对照应该没有扩增曲线。示例如下:
- 如果使用的常规PCR扩增,需要电泳检测(由于样本宝贵,不推荐此法)。
- -20℃长期放置或立即使用。
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